[Perfemiker] 鼠尾胶原蛋白I型,无菌溶液,溶解于0.006mol/L HAc

Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail (订货以CAS编码或英文名称为准)

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编号:C20-200110
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C20-200110-2ml Perfemiker 2ml
5mg/ml
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C20-200110-10ml Perfemiker 10ml
5mg/ml
¥1650.00 登录后可见
英文名称: Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail
详细描述

产品别名:Collagen, Type I (5mg/ml), from rat tail
产品型号:C20-200110
产品包装:10mg/2ml
产品品牌:Perfemiker

产品描述:溶解于 0.006mol/L HAc,无菌溶液。

 

运输和保存方法
冰袋运输。4℃保存,有效期1年。不可冻存。

产品介绍:

       胶原蛋白(Collagen)是结缔组织和内脏器官外基质的主要成分,但在皮肤、肌腱、骨骼中分布*为广泛。胶原蛋白在结构和遗传学上被分为不同类型,I型胶原蛋白(Collagen, Type I)结构上是由2个α1链和1个α2链组成的异源多聚体,在37℃中性条件下可形成3股螺旋结构,被广泛用于多种细胞的培养基质,如肝细胞、纤维细胞、脊髓神经节、雪旺氏细胞等。另外,I型胶原蛋白在细胞生长、分化、迁移和组织形态的发生等方面也具有重要应用。

       上海创赛科技的鼠尾胶原蛋白I型 (rat tailtendon collagen type I) 是通过Birkedal-Hansen 的方法,通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿 ,培养一些在普通细胞、培养器皿中不易贴壁的细胞。 也可用于制备三维胶 ,模拟真实的生长环境 ,使细胞在三维环境中生长 。

shengyou鼠尾胶原蛋白包被pc-12细胞生长照片

Perfemiker鼠尾胶原蛋白包被的
培养皿中生长的 PC-12 细胞

shengyou鼠尾胶原蛋白三维胶NIH-3T3细胞生长照片

Perfemiker鼠尾胶原蛋白三维胶中
生长的 NIH-3T3 细胞(接种后 5天)

shengyou鼠尾胶原蛋白三维胶电泳

和Sigma鼠尾胶原蛋白(cat# C7661)
SDS-PAGE 电泳对比。
A: Sigma B:Perfemiker

 

使用方法

1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度: 1-5ug/cm2

以包被浓度为 2 ug/cm2 为例:

用无菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。按表 (一)体积加到相应的培养器皿中:

  表面积(cm2 ,每孔或每皿) 加入 0.012mg/ml 胶原的体积 ( ul )
96孔细胞培养板 0.3 50
24孔细胞培养板 1.9 300
12孔细胞培养板 3.8 600
6孔细胞培养板 9.5 1580
35mm细胞培养皿 8 1330
60mm细胞培养皿 21 3500
100mm细胞培养皿 55 9170

确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面,开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后,用PBS洗3-4次后直接使用。

包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。

2、三维胶原的制备

Perfemiker鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上,pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。生友胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成胶过程中需要加入0.06X 体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。

需要的溶液 ( 均需要 无菌 、 预冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示 )或 10x 培养液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 双蒸水

A.不含细胞的三维胶原的制备(以配制1毫升,1mg/ml三维胶为例):将200ul shengyou鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入100ul 10xPBS或10x培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10xPBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

B.含细胞的三维胶原的制备(以配制1毫升,1mg/ml三维胶为例):准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200ul Perfemiker鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul 10xPBS或10x培养液,混匀(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。

 

使用注意事项:

鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶 ,在操作过程中要尽量保持低温 。

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